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01论文摘要
硫胺素(维生素B1)及其活性形式——焦磷酸硫胺素(TPP)——是所有生物体中不可或缺的辅因子。然而，原核生物中工业化的硫胺素生产一直受到严格反馈调控机制的制约，例如由TPP核糖开关所介导的调控机制。本研究探索了裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)——该菌株天然缺乏TPP核糖开关——作为替代性生产宿主的可行性。我们鉴定出细胞外磷酸酶Pho1与Pho4为关键的冗余酶，它们通过水解单磷酸硫胺素来支持硫胺素营养缺陷型菌株的生长。通过删除信号肽对Pho1和Pho4进行细胞内滞留工程改造后，增强了细胞内硫胺素的合成能力;这一效应体现在TPP对nmt1+基因的抑制作用得到强化。该改造有效降低了由可被硫胺素抑制的nmt1启动子驱动的异源基因的渗漏性基础表达水平，同时并未影响该启动子的强诱导性，从而为S. pombe构建了一个优化的基因表达系统。本研究为硫胺素代谢机制提供了新的见解，并为优化真核生物表达系统提供了有效的工程化策略。
02新芝产品支持
Growth was monitored in a SCIENTZ (MGC-500) growth curve analyzer at 30◦C for 72 h with continuous orbital shaking at 200 rpm, following a 10-s pre-shaking step.
在 30°C 条件下，使用 SCIENTZ( MGC -500) 微生物生长曲线分析仪对样本进行 72 小时的生长监测，期间以 200 rpm 的转速进行连续轨道振荡，此前需进行 10 秒的预振荡步骤。
在本研究中，裂殖酵母长达72小时的连续培养与实时监测，正是由新芝MGC-500微生物生长曲线分析仪全程承担。MGC-500在200 rpm的连续轨道振荡条件下稳定运行72小时，为研究人员提供了完整、可靠的酵母生长动态数据。该设备将微生物培养与生长曲线检测合二为一，全过程无需人员值守、无需频繁取样、彻底杜绝污染风险，真正解放人力。研究人员只需设定好参数，即可在72小时内持续获取生长曲线数据，大幅降低了长时间连续监测实验的人力成本与污染风险。
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